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细胞培养重难点

qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。所谓“一定产物量”后续作进一步解释。

细胞铁积累是铁死亡的典型标志之一，亚铁离子积累可以特异性地增加氧化应激水平。例如，在研究氧化应激介导的视网膜色素上皮 (RPE) 变性的潜在机制时，通过用 FerroOrange 染色细胞 (亚铁离子探针)，结果表明 NaIO3和Erastin处理的细胞积累了过多的亚铁离子，说明诱导了铁死亡，而Fer-1或DFO预孵育可以抑制亚铁离子的积累，如图所示。结果表明铁死亡是氧化应激介导的RPE变性的主要病理过程。

目前, 肿瘤免疫治疗临床前动物模型药效评价大多釆用皮下移植瘤小鼠模型 (有些血液肿瘤除外)。而生物学特性更接近临床肿瘤的原位模型却很少采用。皮下和原位肿瘤动物模型主要差别在于肿瘤微环境不同, 这些差别是否对肿瘤免疫反应和治疗造成影响，美国研究人员对这一问题做了细致研究。

DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。

Hu等在2002年最先报道了一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术——双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation，简称BiFC）。

实验技巧 | 做好细胞冻存，保证细胞质量

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。

药效学评价中应关注受试物、试验设计、试验方法、对照药选择，观察指标应与临床相关性好，有效性指标判断明确、准确。

实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。

Western Blot实战经验汇总

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。

免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。

临床前药理学研究的目的是判断一个新药是否有预防、治疗和诊断疾病的作用，即是否有效，有效程度如何。

在基础科研领域，mRNA、IncRNA、circRNA、miRNA是科研界的宠儿，吸引着无数科研狗们前仆后继。打开pubmed搜索RNA的文章，许多篇都有RNA荧光原位杂交（RNA-FISH）的身影，然而受限于实验仪器，技术或者经费的影响，对于一些硕博生们，RNA-FISH始终如那海市蜃楼，可望而不及。没关系，今天科研狗小助手带你手把手做RNA-FISH。

按照现在的学制，硕士生一般两年半到三年毕业，博士生一般三到四年毕业。国外高校一般是一年完成硕士、后面三到四年完成博士，与我国硕博连读完成攻博时间相当。但是仍有一半以上博士生无法如期毕业。拖至五六年才能毕业的学生占相当比例，学生本人很着急，导师也很心焦。

核糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化。

在肿瘤研究过程中，动物实验是理解恶性肿瘤的基本机制以及发现预防、诊断和治疗癌症的必不可少的一种途径。在实际实验过程中，我们不仅要考虑到项目本身的开展情况，也需要考虑到肿瘤对动物会有哪些的影响，也就是需要考虑到人道终点。选择合适的人道终点，将对动物的不良影响降到最低，是3R中“优化”的重要组成部分。

众所周知，新药研发是一个长周期、高投资、高风险的过程。一款新药在进入临床试验之前，非临床阶段的深入、系统研究至关重要。临床前药理药效是其中的核心环节。药效研究涉及药物的基本类型、作用机制、选择性、量效关系、药物的治疗作用与不良反应；毒理研究涉及一般毒理学、急性毒性、长期毒性及特殊毒性试验。正确使用能反映药物作用本质和治疗特征的合适体内外模型则可以为药物进入临床试验提供保障。

1-4泳道分别指XXX蛋白放大表达后的全菌、破碎上清、纯化时20mM咪唑洗脱液以及250mM咪唑洗脱液。