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实验技巧 | 做好细胞冻存，保证细胞质量

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。

药效学评价中应关注受试物、试验设计、试验方法、对照药选择，观察指标应与临床相关性好，有效性指标判断明确、准确。

实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。

Western Blot实战经验汇总

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。

免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。

临床前药理学研究的目的是判断一个新药是否有预防、治疗和诊断疾病的作用，即是否有效，有效程度如何。

在基础科研领域，mRNA、IncRNA、circRNA、miRNA是科研界的宠儿，吸引着无数科研狗们前仆后继。打开pubmed搜索RNA的文章，许多篇都有RNA荧光原位杂交（RNA-FISH）的身影，然而受限于实验仪器，技术或者经费的影响，对于一些硕博生们，RNA-FISH始终如那海市蜃楼，可望而不及。没关系，今天科研狗小助手带你手把手做RNA-FISH。

按照现在的学制，硕士生一般两年半到三年毕业，博士生一般三到四年毕业。国外高校一般是一年完成硕士、后面三到四年完成博士，与我国硕博连读完成攻博时间相当。但是仍有一半以上博士生无法如期毕业。拖至五六年才能毕业的学生占相当比例，学生本人很着急，导师也很心焦。

核糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化。

在肿瘤研究过程中，动物实验是理解恶性肿瘤的基本机制以及发现预防、诊断和治疗癌症的必不可少的一种途径。在实际实验过程中，我们不仅要考虑到项目本身的开展情况，也需要考虑到肿瘤对动物会有哪些的影响，也就是需要考虑到人道终点。选择合适的人道终点，将对动物的不良影响降到最低，是3R中“优化”的重要组成部分。

众所周知，新药研发是一个长周期、高投资、高风险的过程。一款新药在进入临床试验之前，非临床阶段的深入、系统研究至关重要。临床前药理药效是其中的核心环节。药效研究涉及药物的基本类型、作用机制、选择性、量效关系、药物的治疗作用与不良反应；毒理研究涉及一般毒理学、急性毒性、长期毒性及特殊毒性试验。正确使用能反映药物作用本质和治疗特征的合适体内外模型则可以为药物进入临床试验提供保障。

1-4泳道分别指XXX蛋白放大表达后的全菌、破碎上清、纯化时20mM咪唑洗脱液以及250mM咪唑洗脱液。

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC） 是一种病因不明，波及结肠与直肠的慢性、特发性炎性肠病。据世界胃肠病学组织描述，UC在30～70岁人群中发病率基本稳定，性别间发病率也基本持平。但从整体人群而言，该病在世界范围内发病率正在不断上升，在我国等新兴工业化国家和地区这一表现更为显著。所以，需要构建合适的动物模型进行疾病的机制研究。

肝癌(HCC)是世界第5大重要的癌症之一，类型繁多，成年患者约90％是原发性肝癌和肝肿瘤。我国每年约有ll万人死于肝癌，居恶性肿瘤病死率的第2位。男性患HCC的风险是女性的2—5倍，在小鼠中性别差异与人表现一致。目前，手术切除及肝脏移植是肝癌治疗的首要选择，然而肝癌发病隐匿，进展非常迅速，大多数患者确诊时已失去手术最佳时机，病死率居高不下。因此，需要建立良好的肝癌动物模型是人类医学研究的重要条件。

高尿酸血症（hyperuricemia,HUA）是一种遍及全球的代谢性疾病，全球发病率为5％～25％，我国发病率估计已超过10％。HUA已经成为高血压、高血脂、高血糖“三高” 之后的第四高，严重危害人类健康。

冠心病（Coronary Heart Disease，CHD）是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称，亦称为缺血性心脏病。是由冠状动脉功能性改变（痉挛）或全身性动脉粥样硬化累及冠状动脉，导致管腔狭窄甚或堵塞，心肌缺血缺氧引发的心脏病。CHD因其高发病率、高致残率和高致死率被称为人类健康”头号杀手“。建立合理的 CHD动物模型是进一步探索其发病机制、病理过程、寻找有效治疗途径的关键环节。

食道癌（esophageal carcinoma，EC）是一种常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁人类健康。根据2018年全球癌症统计显示，食道癌的发病率和死亡率分别在癌症相关数据排在第7位和第6位。食道癌被认为是“沉默”癌症，早期症状不明显，超过一半的病人确诊时已是晚期且出现可见的转移灶。中晚期的食道癌患者5年生存率低于15％，即便手术切除肿瘤也无法根治，术后5年生存率仅有15％-24％，因此目前食道癌仍是无法治愈。

大小鼠平衡木实验（Balance Beam Test）是一种常用于评估大鼠和小鼠运动协调性和平衡能力的行为学测试方法。该实验通过观察动物在平衡木上行走的能力来评估其运动功能。