读懂qPCR熔解曲线“峰”言“峰”语
在qPCR的世界里,扩增曲线负责目标基因“有多少”,堪称数据的“生产部门”;而熔解曲线则肩负着关键的“质检”使命,专门鉴定产物的真实身份,回答“是不是”的核心问题。它是实验结果的“首席鉴官”,确保最终数据的可信度。
那么,这位“鉴官”是如何工作的呢?qPCR熔解曲线是指在PCR扩增结束后,通过缓慢升温并实时监测荧光信号变化而绘制出的曲线。其基本原理在于:不同序列的DNA片段因其GC含量、长度和特异性的不同,具有独一无二的熔解温度(Tm值)。就像不同的物质有不同的熔点一样,熔解曲线能借此区分出目标产物与非特异性产物。
具体来说,当反应体系中含有SYBR Green I等染料时,它们会特异性地嵌入双链DNA并发出荧光。随着温度升高,双链DNA逐渐“解绑”成单链,染料随之脱落,导致荧光信号减弱。通过记录荧光强度随温度升高而下降的过程,即可生成熔解曲线;进一步对荧光强度变化率(-dF/dT)与温度作图,便得到了我们用于分析的特征峰图。每个峰的出现,都代表一种特定DNA结构的“熔解事件”。
109 人阅读发布时间:2026-01-23 13:05