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脑缺血再灌注模型和全脑缺血动物模型(图文详解)

人阅读 发布时间:2020-06-01 14:47

脑缺血在临床上具有较高的发病率和死亡率,严重危害中老年患者健康,寻找有明确疗效且作用机制清晰的预防和治疗脑梗死的药物是当前研究的前沿课题和热点领域。因此,脑缺血动物模型的制备在科学研究中具有重要意义。
中脑动脉栓塞 MCAO(middle cerebral artery occlusion )和脑卒中 CVA(cerebralvascular accident)在实验过程中最为常用,下面我分享一下我们实验室的造模方法。    
1  MCAO 模型制备

术前准备见左图,选择 220-250g 的 SD 大鼠,10% 水合氯醛(300uL/100g)麻醉保定,仰卧位,颈部正中剃毛消毒备用(右图)
脑缺血再灌注模型(MCAO)      
剪开颈部皮肤,钝性分离颈部肌肉,暴露并游离单侧颈动脉,穿线备用。  
脑缺血再灌注模型(MCAO)
动脉夹暂时夹闭主动脉,并结扎颈外动脉。主动脉用注射器针头挑开小口,插入自制线栓到颈内动脉,大约 2.5-3cm。结扎颈内动脉,结扎主动脉近心端,松开动脉夹。

 脑缺血再灌注模型(MCAO) 
  逐层缝合,根据实验的需要的缺血时间进行拔栓手术(再灌注),拔栓时动物要完全麻醉,把出线栓的长度约为 0.5cm。
  
2  CVA 模型制备
全脑缺血常用的方法是四动脉阻断法(occlusion of four blood vessels)
SD 大鼠,10% 水合氯醛(300uL/100g)麻醉保定,俯卧卧位,颈部正中剃毛消毒备用。剥离皮肤和肌肉,暴露第一颈椎横突翼,找到左右两侧横突孔。
  
将灼热的电烙铁尖头直接插入翼突孔,电凝双侧椎动脉造成永久性闭塞,避免损伤脊髓和脑干。
  
  逐层缝合枕部皮肤,并消毒。
  
之后,仰卧位消毒备用,游离双侧颈总动脉,留线备用,动脉夹夹闭双侧颈总动脉 15-30 分钟,松开动脉夹,逐层缝合,手术完成。
   
3  模型成功的评判方法

神经功能缺损(NDS)评分
0 分:活动基本正常,无明显神经病学症状;
1 分:左侧前爪无法完全伸展;
2 分:爬行时向左侧转圈;
3 分:行走时向偏瘫侧倾倒;
4 分:不能自动行走,有意识障碍
5 分:死亡

水迷宫实验
Morris 水迷宫(Morris water maze, MWM)实验是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳,学习寻找隐藏在水中平台的一种实验,主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习记忆能力。(左图正常,右图模型)
  水迷宫实验
TTC 染色
TTC 染色是常用来评价脑缺血损伤的指标,缺血区域会呈白色。(从左到右依次为正常;MCAO 模型;CAV 模型)
TTC染色   
HE 染色
一般发生缺血损伤的脑组织的神经元细胞会受到明显损伤(上侧正常,下侧损伤)
HE染色
HE染色  

TUNEL 染色
发生损伤的脑组织,TUNEL 染色的细胞会明显增多。
 
TUNEL染色


关于 MDL
MDL(Medical Discovery Leader)聚焦于医学科学基础研究与转化医学的研究,服务于国内以及国外科研人员,为疾病的诊断、预防、治疗提供研究基础。自有实验室超过 6000 平米,主营业务范围涵盖模型动物、细胞生物学、分子生物学、蛋白、病理学。经过 10 余年的发展,我们与国内超过百余家的研究机构上千名研究人员共同完成了 12000+ 的实验项目。

 

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