Co-IP精准拿捏蛋白"最佳搭子"

Co-IP基于抗原-抗体特异性结合的原理，实现对目标蛋白及其互作蛋白的捕获与鉴定。

其核心步骤包括：

靶蛋白捕获：利用特异性抗体识别并结合溶液中的目标蛋白（Bait protein），形成抗原-抗体免疫复合物。

互作蛋白共沉淀：与靶蛋白直接或间接结合的其他蛋白质（Prey protein）随免疫复合物被一同沉淀。

复合物分离与检测：通过离心等方式分离复合物，进一步采用Western Blot、质谱分析等技术对共沉淀蛋白进行定性与鉴定。

技术优势：

✔在接近生理条件下研究蛋白质相互作用，有助于保持蛋白质天然构象及复合物完整性；

✔适用于内源性蛋白互作研究，无需对目标蛋白进行人工修饰或标记；

✔广泛应用于信号转导、病毒-宿主互作、转录复合物组装等多个研究领域；

二、实验流程示意图与解析

                                                                     (图片来源PMID_38774355)

假设脂滴表面存在已知蛋白A（Bait，绿色标示），推测其可能与蛋白B（Prey，红色标示）发生相互作用。若该推测成立，则在脂滴移除后的裂解液中应存在“A-B蛋白复合体”。

Co-IP实验通过使用蛋白A的特异性抗体（Anti-A）与细胞裂解液共孵育，形成“蛋白A-抗体”复合物。随后加入可结合抗体Fc段的磁珠（Beads），进一步形成“蛋白A–抗体–磁珠”三元复合物。经磁性分离与洗涤去除非特异性结合后，沉淀中应包含蛋白A、蛋白B及抗体。

将所得复合物进行Western Blot检测，若可见蛋白A与蛋白B的特异性条带，则证明两者存在相互作用；反之则提示推测有误或实验过程中存在技术问题。

三、典型结果示例

如果蛋白A和蛋白B有相互作用，那么通过western blot可以分别检测到蛋白A和蛋白B的条带。以下是一个最基本的结果示例图：