细胞被气泡“团灭”？实验气泡克星秘诀教你轻松拿捏！

1、气泡产生的原因

在吹打细胞悬液的过程中，气泡的产生主要与以下几个因素有关：

机械作用：吹打操作本身是一种机械搅拌过程，当液体被快速搅动时，空气容易被卷入液体中，形成气泡。这种气泡的形成与液体表面的张力以及搅拌速度密切相关。

液体性质：细胞悬液中可能含有蛋白质、脂类或其他表面活性物质，这些物质会降低液体的表面张力，使得气泡更容易形成并稳定存在。

操作条件：吹打的速度、力度以及使用的吸管类型都会影响气泡的产生。快速且剧烈的吹打更容易引入空气。

2、气泡对细胞的影响

气泡在细胞悬液中的存在可能对细胞产生不利影响：

细胞损伤：气泡破裂时会产生高能量耗散率，可能导致周围细胞的损伤，尤其是对于敏感的细胞类型，如CHO细胞。

细胞存活率降低：气泡的存在可能干扰细胞的正常生长和代谢，导致细胞存活率下降。

实验误差：气泡可能影响细胞计数的准确性，导致实验结果的偏差。

3、减少气泡产生的处理方法

① 优化吹打技术

✔轻柔操作：吹打细胞悬液时应避免过于剧烈的操作，以减少气泡的产生。可以使用移液器以缓慢而稳定的速度进行吹打，避免快速抽吸和释放。

✔倾斜角度：将移液器倾斜45°角进行吹打，可以减少气泡的形成。

②使用防气泡移液器

✔低吸附移液器吸头：使用低吸附移液器吸头可以减少液体表面张力，从而减少气泡的产生。

✔带滤芯的吸头：滤芯可以防止液体进入移液器内部，减少气泡的形成。

③预润湿移液器吸头

在吹打细胞悬液前，先用培养基或缓冲液预润湿移液器吸头，可以减少气泡的生成。

④使用气泡去除装置

✔气泡捕集器：在细胞培养系统中使用气泡捕集器可以有效去除培养基中的气泡，确保细胞悬液的纯净。

✔离心去除气泡：将细胞悬液低速离心（如200-300g，5min）可以使气泡浮到液面，然后小心吸取下层无气泡的悬液。

⑤调整培养基成分

✔添加表面活性剂：在培养基中添加适量的表面活性剂可以降低液体表面张力，减少气泡的形成。

✔优化培养基pH和温度：确保培养基的pH和温度适宜，可以减少气泡的生成。

⑥使用无气泡培养系统

✔封闭式培养系统：使用封闭式细胞培养系统可以减少外界空气的进入，从而减少气泡的产生。

✔微流控技术：在微流控芯片中进行细胞培养可以有效控制液体流动，减少气泡的形成。

⑦定期检查和维护设备

✔检查移液器密封性：确保移液器的密封性良好，避免因漏气而产生气泡。

✔清洁和维护设备：定期清洁和维护细胞培养设备，确保其正常运行，减少气泡的产生。