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手把手教你做小鼠蛛网膜下腔出血的穿刺模型

人阅读 发布时间:2024-02-26 13:13

蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)分自发性与创伤性SAH,其中75~80%的自发性SAH是由于颅内动脉瘤破裂引起。虽然SAH只占脑卒中的5%,但由于其高病死率,且患病平均年龄仅为55岁,因此,SAH是严重威胁人类健康的疾病之一。

一、动物的选择

雄性 C57BL/6 品系 SPF 级小鼠。

二、SAH动物模型制备

动物模型采用颈内动脉穿刺的方法,并对SAH模型的严重程度进行评分,评分≤7分的小鼠将排除在本研究之外。

具体步骤:1.0%Pelltobarbitalum Natricum溶液按照40mg/kg 腹腔注射,待麻醉满意后(角膜反射消失、刺痛鼠尾时无反应),备皮,仰卧位固定,1%碘伏消毒,用眼科剪刀在颈部前正中线直行剪开约2.5厘米皮肤,钝性分离皮下,并用拉钩将皮肤牵至左侧,固定,暴露肩胛舌骨肌,二腹肌后腹,胸锁乳突肌,沿胸锁乳突肌内缘分离筋膜以显露颈总动脉近心端,并由近心端向远心端小心分离,完整显露颈总动脉及分支,颈外动脉及分支,部分颈内动脉及其分支翼腭动脉,电凝颈外动脉的分支甲状腺上动脉及枕动脉,于颈外动脉远心端接近分叉处结扎,动脉夹夹闭颈总动脉近心端及颈内动脉,于颈外动脉远端处用显微剪刀剪开约1.5mm斜形口,并将5.0细线沿切口处插入颈外动脉直至颈总动脉,单结固定颈外动脉,打结时要注意松紧度,既要保证不出血,又要有一定的通过度,满意后退线并与颈外动脉一同将细线向下外侧牵拉并调整角度,向颈内动脉送线,送入长度约12-15mm,如造模成功会观察到小鼠呼吸深大,频率减慢,心率加快,此时退线,结扎颈外动脉残端,松开动脉瘤夹,见无活动性出血后逐层缝合,消毒后将小鼠至于36.0±0.5摄氏度保温板上复苏。

三、评价指标

1、SAH模型严重程度的形态学评估

采用Takashi Sugawara 等对SAH动物模型严重程度的评估方法,SAH造模后24小时取脑,将基底池分6个部分:桥脑尾侧二分之一,桥脑头侧二分之一,左右大脑半球两部分又被Willis 环中点水平线分割成头尾两部分,每个部分按照出血严重程度评0~3分,没有出血评0分;少量出血1分;中等量出血,动脉轮廓可辨认2分;大量出血,无法分清动脉轮廓3分,满分18 分,最低0分。依照6个部分的得分总和将SAH模型分为3个等级:0~7分:轻度出血;8~12分:中度出血;13~18分:严重出血。剔除轻度出血小鼠模型。

2、造模后神经功能学评估

1995 年 Julio H. Carcia等提出的神经功能评分后来又经 Takashi Sugawara 等改良现已广泛应用于SAH后的评估详见表1。此外,平衡木评分也用于 SAH 造模后神经功能的评估,平衡木评分是在长度90cm,宽度1cm两个平板间的横木上进行,受试小鼠分别在两边平板上放置10s以熟悉环境,再把小鼠放置在平板中间,观察其移动,详见表2。

表1 改良的加西亚评分表

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表2 平衡木评分

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