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北京百奥思科生物医学技术有限公司
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试剂、技术服务、论文服务、细胞库 / 细胞培养、抗体
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实验干货 | 常用分子生物学技术原理
人阅读 发布时间:2023-07-21 08:59
1. 分子杂交与印迹技术
(1)探针是经过特殊标记,能与待测单链核酸分子互补结合的已知核酸片段
(2)印迹是将电泳分离后的大分子转印到硝酸纤维素膜上,以便杂交的技术
(3)DNA印迹:Southern blotting,用于检测基因组DNA
(4)RNA印迹:Northern blotting,主要用来检测mRNA的表达水平
(5)蛋白质印迹:Western blotting,用于检测蛋白质的水平
2. PCR技术
(1)反应体系:单链DNA模板、特异性DNA引物、耐热DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)、dNTPs底物、含Mg2+的缓冲液。
(2)反应步骤:变性、复性、延伸
(3)逆转录PCR:即RT-PCR,在PCR之前先将单链mRNA逆转录成cDNA。这是目前从RNA水平出发研究基因表达或获得目的基因最有效的方法。
(4)应用:目的基因的克隆、基因的体外突变、微量DNA或RNA扩增、DNA序列测定、基因突变分析
3. 蛋白质相互作用研究
酵母双杂交技术、CoIP
4. DNA-蛋白质相互作用
电泳迁移率变动分析(EMSA)、染色质免疫沉淀技术(ChIP)
5. 基因敲除
即gene knock-out,通过同源基因重组原理使得某个基因活性丧失,从而研究该基因功能的方法