细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。原代细胞具有高度的灵敏性,是现代生物学技术中常用的细胞之一,原代细胞分离培养技术也是生物技术中常用的技术。下面介绍一种常用的酶消化法分离BMSC的方法。

    分离方法

1. 1)BMSC 的分离:取 4 周龄雄性大鼠颈椎脱臼处死,75% 乙醇浸泡 15 min。无菌条件下分离胫骨、股骨,剪开胫骨、股骨干骺端,再用 1 ml 注射器吸取预冷磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)冲洗骨髓腔,获得骨髓细胞悬液,置于含有 10% FBS 和双抗(青霉素 100U/ml、链霉素 100U/L,PH:7.2-7.4)的 DMEM/F-12 中,37 ℃、95%湿度和 5% CO2 培养箱中培养。24 h后首次半量换液,然后每 3 d 全量换液。

2. 2)BMSC 的传代:当黏附细胞长到 80% 融合时可进行细胞传代。倒掉培养瓶中的液体,PBS 冲洗 3 次,加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL,轻摇摇动培养瓶,然后培养箱中孵育 5 min。孵育结束后立即倒掉胰酶,迅速加入 0.5 mL FBS 终止消化,然后加入 5 mL PBS,用移液器轻轻吹打瓶底细胞,传代比例为 1:3。

实验结果

分离后2天

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分离后5天
 

关于MDL
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